成果信息

本设计与传统方法相比，利用酶免疫分析法检测干酪素等乳制品中碱性磷酸酶的活性具有操作简便、检测限低和灵敏度高的优点，同时该方法直接排除了阴性和阳性控制过程，使操作步骤简化，如果能将该方法商品化，将大大提高检测效率。主要指标：1.纯奶经正丁醇处理得粗酶液；粗酶液依次经盐析、Sephadex G-25层析柱、DEAE-Cellulose 52离子交换层析柱和Sephadex G-200层析柱纯化制得样品。以对硝基酚磷酸酯(p-NPP)为底物测定该酶的性质，其最适温度为41.5℃，最适pH值为10.0，以双倒数法作图，测得该酶米氏反应常数Km=7.39mmol/L。2.碱性磷酸酯酶单克隆抗体酶免疫分析的标准曲线，检出范围为１ng\mL-300ng\mL。)

背景介绍

磷酸酯酶(phosphatase)是细菌代谢过程中产生的一种中间产物，在细菌大量生长繁殖的情况下, 磷酸酯酶的活性也随之增加，呈现阳性反应。根据反向推理的原理，如果对某一产品经检测磷酸酯酶为阳性，即说明该产品中含有的细菌数量较多，具有一定的危害性。目前，一些发达国家在食品工业中，采用对最终产品进行磷酸酯酶的检测，来判定这些产品的内在卫生质量。此外，磷酸酯酶也是乳汁中普遍存在的一种酶，是乳细胞代谢的产物，缔合在乳脂球膜上。该酶热稳定性高，在巴氏杀菌条件下，62.8℃，30min或71.7℃，5s，可完全灭活，届时乳中其他无芽孢致病微生物也全部杀死。因此，磷酸酯酶活性的测定也被用于乳制品中巴氏杀菌效果是否完全的判定方法。目前，国内外有关在干酪素中磷酸酯酶检测方法的报道甚少。个别方法程序复杂繁琐，检验过程较长，且检验成本较高，不能满足我国出口检验检疫工作的需要。)

应用前景

本设计操作简便、检测限低和灵敏度高，同时本方法直接排除了阴性和阳性控制过程，使操作步骤简化，如果能将该方法商品化，将大大提高检测效率，可见具有巨大的经济和社会效益。)