成果信息

效表达与纯化可溶性重组人ＰＣＴ蛋白，制备高灵敏度和高特异性的抗人ＰＣＴ医用诊断单克隆 抗体。方法：大肠杆菌表达重组人ＰＣＴ蛋白后，利用饱和硫酸铵沉淀和亲和层析方法纯化 ＰＣＴ蛋白后，经质谱、 Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎｂｌ ｏ ｔ和间接 ＥＬＩ ＳＡ法进行性质鉴定和分析重组蛋白的表达与免疫反应性；重组蛋白免疫小鼠，经细胞融 合及筛选制备抗ＰＣＴ单克隆抗体（ｍＡｂ），获得７株抗ＰＣＴ单克隆抗体细胞株，经ＥＬＩＳＡ鉴定，筛选抗体可与 ＰＣＴ抗 原有良好的特异性反应。结论：利用重组人ＰＣＴ蛋白免疫制备了抗人ＰＣＴ单克隆抗体，为进一步研发 ＰＣＴ快速 诊断试剂提供了原料。 应用前景：利用重组人ＰＣＴ蛋白免疫制备了抗人ＰＣＴ单克隆抗体，经过厦门大学传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心和北京热景生物技术有限公司评估，该抗体的特异性和亲和力达到国际优质抗体的同类水平，可以作为 ＰＣＴ快速诊断试的原料以及进行产业化。)

背景介绍

细菌感染导致的抗生素滥用致细菌耐药是我国乃至全球范围最突出的公共卫生问题之一，并且由其导致的脓毒血症也严重危害着人类健康，成为非心脏ICU死亡的主要原因。普通的细菌感染本身并不可怕，只要早期诊断明确并针对性治疗，不会造成严重后果。所以，细菌感染的早期诊断和鉴别诊断极为重要。临床常用传统感染诊断指标主要有外周白细胞计数(WBC)、血液中C反应蛋白(CRP)和血液细菌培养等，但都存在费时、误差大、灵敏度低、特异性差等缺点，因此，应用新的标志物来诊断细菌感染性疾病非常必要。降钙素原(PCT)是一种有116个氨基酸残基组成、分子量为13kDa的糖蛋白，血清降钙素的前体物。生理情况下，血中PCT浓度极低，基本检测不到，但在一些细菌感染性疾病，包括细菌感染引发的全身炎症反应、败血症或脓毒性休克等患者中血清PCT水平显著升高，并且和疾病严重程度呈正相关。因此，PCT可作为一种高灵敏的新的炎症检测指标。)

应用前景

目前PCT的主要测定方法包括定性(半定量)测定和定量测定两种方式。主流的诊断产品均为国外进口，价格昂贵。因此，研发具有自主知识产权、有较高灵敏度和特异性的PCT检测技术和相应产品，具有重要的社会和经济价值。)